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技術(shù)文章

細(xì)胞骨架研究中的“金標(biāo)準(zhǔn)”工具---鬼筆環(huán)肽


 

AAT Bioquest鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種從毒蘑菇(如鵝膏菌屬)中提取的物質(zhì),因其獨(dú)特的生物學(xué)特性,在生命科學(xué)研究中具有重要應(yīng)用。

 

1. 高特異性結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白

靶向性強(qiáng):選擇性結(jié)合細(xì)胞骨架中的F-肌動(dòng)蛋白(微絲),幾乎不與其他蛋白相互作用,背景干擾極低。

 

穩(wěn)定結(jié)構(gòu):與肌動(dòng)蛋白結(jié)合后,可防止其解聚,維持細(xì)胞骨架形態(tài),便于長期觀察。

 

2. 標(biāo)記能力好

熒光標(biāo)記兼容性:常與熒光染料(如FITC、TRITC、Alexa Fluor系列)偶聯(lián),實(shí)現(xiàn)高分辨率顯微成像(共聚焦、超分辨顯微鏡等)。

 

低濃度有效:納摩爾級(jí)濃度即可清晰標(biāo)記,減少對(duì)細(xì)胞活性的影響。

 

3. 保持細(xì)胞活性(活細(xì)胞成像)

穿透性改良衍生物:如BODIPY-鬼筆環(huán)肽,可通過細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察(需優(yōu)化條件)。

 

固定細(xì)胞優(yōu)選:對(duì)固定后的細(xì)胞滲透性好,是**熒光共定位的理想選擇。

 

4. 高穩(wěn)定性和信噪比

抗光漂白:部分衍生物(如Alexa Fluor偶聯(lián)物)耐光性強(qiáng),適合長時(shí)間拍攝。

 

低背景噪聲:特異性結(jié)合減少非特異性信號(hào),提升圖像質(zhì)量。

 

5. 廣泛應(yīng)用場(chǎng)景

細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究:清晰顯示微絲分布(如偽足、應(yīng)力纖維)。

機(jī)制:研究癌癥遷移、神經(jīng)突觸可塑性等。

篩選:評(píng)估化合物對(duì)細(xì)胞骨架的影響。

 

6. 與其他技術(shù)的兼容性

可與抗體標(biāo)記(如微管蛋白、細(xì)胞器標(biāo)記)聯(lián)合使用,實(shí)現(xiàn)多色成像。

適用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、組織切片等多種樣本類型。

 

 

注意事項(xiàng)

毒性:天然鬼筆環(huán)肽劇毒,需謹(jǐn)慎操作;熒光衍生物毒性較低。

活細(xì)胞應(yīng)用限制:需選擇透膜性衍生物,并優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。

 

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圖1.Phalloidin-iFluor®488 Conjugate在熒光顯微鏡下使用FITC濾鏡(綠色)染色HeLa細(xì)胞的熒光圖像。將細(xì)胞固定在4%甲醛中,用線粒體染料MitoLite?Red FX600 (Cat#2677,紅色)和Nuclear Blue?DCS1 (Cat#17548,藍(lán)色)共同標(biāo)記。

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圖2.用 4%甲醛固定 HeLa 細(xì)胞,接著用 Cell Navigator® F-肌動(dòng)蛋白標(biāo)記試劑盒(紅色熒光)在 Costar 黑色 96 孔板中進(jìn)行染色的熒光圖像。細(xì)胞分別用鬼筆環(huán)肽-iFluor® 594(貨號(hào) 23122,紅色)和細(xì)胞核染色劑 DAPI(貨號(hào) 17507,藍(lán)色)進(jìn)行標(biāo)記。在固定前,細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)用 ER Green?(貨號(hào) 22635,綠色)進(jìn)行染色。

 

AAT Bioquest鬼筆環(huán)肽憑借其高特異性、穩(wěn)定標(biāo)記能力和廣泛適用性,成為細(xì)胞骨架研究中的“金標(biāo)準(zhǔn)”工具,尤其在熒光顯微技術(shù)中不可或缺。

 

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